Pink or Blue® DNA Testi nasıl çalışır?

Pink or Blue® DNA Testi nasıl çalışır?

Bir önceki Dna Erken cocuk cinsiyet testi yazımısın devamı, bir önceki yazımızı okumak icin lütfen tıklayınız.

On yılı aşkın bir süredir hamile kadınların kanının küçük miktarlarda fetal (cenine ait) DNA’sı ihtiva ettiği bilinmektedir. . DNA deoksiribonükleik asit demektir kişinin eşsizliğini belirleyen genetik bilgiyi içerir. DNA’mızın çoğu kromozom denilen ipliksi gövdelerdeki hücrelerimizin çekirdeğinin içindedir. İnsanlarda, 46 kromozom vardır, bunların ikisi X ve Y cinsiyet kromozomlarıdır (unutmayın XY erkek ve XX’de kadındır).

1990’larda, DNA’yı tanımlamak için polimerize zincir tepkime (PCR) ile DNA moleküllerinin segmentlerinin hızlı büyütülmesine dayalı çok hızlı, sağlam, duyarlı ve spesifik bir metot ortaya çıktı.
PCR, araştırmacıların küçük miktarda başlangıç malzemeden spesifik bir DNA serisinden
milyonlarca kopya üretmelerine kan sağlar. Y Kromozom DNA’sı bizim erkek bir çocuk
sahibi olmamız için gerekli olduğundan, testimiz bu sinyali yükselterek (bu spesifik
DNA’nın milyonlarca kopyasını yaratmak) Y kromozomsal DNA’sını arar. Küçük miktarda
Y DNA’sı bulmak çok zordur ve sonuçların kaliteli olması için çoklu kontroller
bulunmaktadır.

Klinik düzende annenin kanında Y kromozomsal DNA’sını tespit etme prosesini geçerli
kılan klasik çalışma, Journal of Human Genetics’de 2005’te yayımlanmıştır. Galbiati ve
diğerleri 1837 hamile kadından gebeliklerinin farklı periyotlarında kan almış ve fetal
DNA’yı hamileliğin 5. Haftası kadar erken bir şekilde ayırmışlardır. Bu erken doğumlar,
düşükler ve canlı doğumları içermiştir. İzole edilen DNA PCR kullanarak yükseltilmiş ve analiz edilmiştir.
Test sonuçları bebeğin doğumundan sonra teyit edilmiştir çalışma %99 doğrulukla cinsiyeti tahmin etmiştir.
Not: Galbiati araştırma çalışmasındaki %99 doğruluk oranı kontrollü koşullarda ve çok daha fazla kan örneği ile gerçekleştirilmiştir. Tüketicinin elindeki Pink or Blue® test doğruluk oranı aşağıda anlatılan dahili araştırmamıza dayalı olarak %95’in üzerinde hesaplanmaktadır.
Pink or Blue® testi annenin kanında erkek DNA’sının mevcudiyetini tespit etmekte oldukça doğrudur. Ancak, annenin kanında erkeğe has DNA’nın çıkmasına yol açabilecek önceden kan nakli yapılması, birden fazla hamilelik yaşanmış olması ya da kemik iliği transferi gibi birkaç durumda vardır. Ancak çok nadir de olsa, bunlarolduğunda yanlış sonuçlar çıkarabilmektedir.
Eğer aşağıdakilerden bir ya da daha fazlası sizin için doğru ise Pink or Blue® testini almanızı ÖNERMİYORUZ:

1.  Mevcut gebeliğinizden önceki üç ay içinde düşük yaşadınız ya da kürtaj oldunuz
2.  Size herhangi bir zamanda bir erkekten kemik iliği transferi yapıldı
3.  Son 18 ay içinde kan nakli yapıldı
4.  Kanla ilgili tedavi için ilaç alıyorsunuz ve/veya anticoagulant tedaviye tabi tutuluyorsunuz.

Patentli teknolojimiz bebeğin cinsiyetini doğru şekilde tahmin etmek için bebeğin kanından annenin kanına doğal DNA hareket prosesini kullanır. Testimiz gebelik sonrası 7 haftaya kadar erken bir dönemde 6000 kadından fazlası üzerinde cinsiyet belirlemek için kullanılmıştır. Bunu, -DNA’yı ayrıştırabilmek ve daha sonra da fetal Y kromozom DNA’sını yükseltebilmek için- gen kartının üzerindeki kan örneğini arındırarak yapıyoruz.

Galbiati’nin metotlarından farklı olarak kan almaya ihtiyaç duymuyor ve 100 ile 1000 kat daha az kan kullanıyoruz. Y Kromozomsal DNA’nın olmaması bir kızı işaret ederken, Y kromozom DNA’sının olması bir erkek olduğunu gösteriyor. Pink or Blue® testi evinizde rahatlıkla gerçekleştirmeniz için uygundur. Kir parmağı temizlemek için alkollü bezler, parmağı çizmek için neşterler (bıçaklar) ve kan damlalarının toplanması için bir gen kartından oluşmaktadır. Gen kartı ve bir onay formu işleme için laboratuarımıza geri postalanır. Cinsiyeti olabildiğince
doğru tespit etmek için bu form üzerindeki forma ihtiyaç duyarız.
Teknolojimiz literatürde bulunan önceki metotlardan daha duyarlıdır ve bu nedenle sadece üç damla anne kanı
ile (gen kartındaki bir daireyi doldurmak için gerekli ortalama damla miktarı) doğru cevap verebilmektedir.
Sonuçlar bu küük miktardan alınabilse de, annenin kesin olmayan sonuçlar olması halinde elimizde bolca bilgi
olması için üç daireyi de doldurmasını istiyoruz. DNA örneğini kalite güvence ve güvenilirlik amaçları için daima
iki kez test ederiz. Erkek spesifik DNA bebek erkek ise örnekte mevcut olacaktır.
Doğruluğumuzu nasıl tespit ederiz.Doğruluğumuzu ölçmek için bir kalite iyileştirme metodu geliştirdik ve bunu %99 doğruluğa erişmek amaçlı
prosesimizi iyileştirmek için kullanırız. Müşterilerimizin iddialarımızı geçerli kılmak için tarafsız bir çalışma
isteyebileceklerini düşündük ve tamamlandığında müşterilerimizle paylaşacağımız iki klinik çalışma
gerçekleştiriyoruz. Bu çalışmaların her ikisi de California’da gerçekleştirilmektedir. Bu arada sizinle dahili
laboratuar cinsiyet belirleme doğruluğunu nasıl tespit ettiğimizi paylaşacağız.
Örnek seçimi
Örneklerimiz gen kartına damlatılan anne kanından oluşmaktadır. Gen kartı, kanı, işleyip postalamak güvenli
olacak şekilde polimerize eder. Laboratuarımıza geldiğinde, gen kartı kağıdı parçalara ayrılır ve arıtma işlemi
yapılır. Laboratuarda 2007 Eylül ile 2008 Mart arasında gelen 31 müşteri gen kartı bu dahili çalışma için
seçilmiştir. Örnekler aşağıdaki kriterlere dayalı olarak seçilmiştir: 1) Kan; Consumer Genetics Inc’in online
gebelik hesaplamacısını kullanarak hesaplanan en azından 7 haftalıkken alınmıştır, 2) erkek ya da kız sonucu
müşteriye açıklanmıştır, 3) test sonucu ultrason, amniyosentez ya da doğum sertifikası ile teyit edilmiştir
(araştırmamızı yaparken müşterilerimizin doğru söylediğine inanıyoruz ancak durum
her zaman böyle olmayabilir) ve kalite kontrol testi için yeterli gen kartı kalmıştır.
Temel prosedür DNA gen kartından çıkarılmış ve daha sonra mevcut olabilecek tüm hücre
birikintileri, protein ve RNA’dan ayrılmıştır. Bu arındırılmış DNA PCR Tekniğini
kullanarak yükseltim için hazırdır. PCR tekniğini kullanarak Y kromozom DNA’sını
ararız. PCR yükseltimi Y kromozom DNA’sı tespit edildiği için yapılırsa, örnek
erkektir ve yükseltim meydana gelmezse örnek kızdır.
Kontrollerde neler var?
DNA Ayırma ve arındırma kontrolleri on müşteri örneği partisi ile paralel arındırılan bir dişi kontrolünü içerir.
Dişi kontrol yükseltim prosesinin arka plan sinyalini belirlemek için kullanılır (unutmayın, sadece fetal erkek
DNA’sını yükseltmeye çalışıyoruz, bu nedenle dişi DNA arka plan olmaktadır).
Bireysel numuneler için örnekler kirlenme kontrollerini; DNA ayrıştırma ve arındırma sonuç kontrolleri ve bulaşma kontrolünü de içerir. Erişkin erkek DNA’sının mevcudiyetini teyit etmek için de birkaç metot geliştirdik.
Erişkin DNA’nın mevcudiyeti numuneyi kirletecek ve küçük miktarda fetal erkek DNA’sını yükseltmeyi çok daha zor hale getirecektir. Biz özellikle fetal Y kromozomdan farklı erişkin Y Kromozomunun belli segmentlerini ararız. Eğer bunlar bulunursa, o zaman kirlenme olduğunu anlarız. Bu sonuçlar 100%’dür. İnhibisyon testimiz örneğe bilerek eklenen küçük miktarda erişkin erkek DNA’sını kullanır. Hedefimiz Y kromozom DNA’yı elle koyduğumuzdan İnhibisyon kontrolü yükseltimini göstermelidir. Eğer yükseltim tespit edilmezse, reaksiyonda, prosesin daha fazla DNA yapmasını engelleyen kirleticiler olmalıdır.
Analiz
1. Elinizi Pink or Blue DNACinsiyet Test Kitinde verilen bıçakları kullanarak delin.
2. Delinen ele bir damla kan görününceye kadar bastırın.
3. Kanı kitin içindeki DNA klama kartına damlatın.
Örneklertest için Laboratuara geri gönderilmelidir.PCR makinesi arındırılmış DNA örneğinde ne kadar Y kromozom DNA’sının mevcut olduğunu işaret eden rakamları verir.
Bu veri değerleri bunların iki eşik değer (üst ve alt değer) arasında olup olmadığına ilişkin analiz edilir. Üst ve alt eşik arasındaki bölge müşterilerimiz için en doğru sonuçlar sağlamak için yeterlidir. Bu önemli bir noktadır.
Kesin olmayan (kifayetsiz) sonuç durumunda, yeterli miktarda varsa yeniden işleme tabi tutulur. Eşiğe ilişkin bu yeni veri değerlerinin incelenmesi bize genellikle güvenli cinsiyet tespiti sağlayacaktır. Bu arındırmalardan hiç biri tespit için yeterli veri sağlayamazsa, müşteriden yeni bir numune talep ederiz. Bize yeni numune göndermeyi seçerlerse, hamileliğinde ilerledikçe kadında daha fazla miktarda fetal DNA olacağından sonuçlar daha da açık olur (böylece eğer erkekse bunun
işareti daha da fazla görünür).
Kifayetsiz sonuçları doğru olarak nitelemeyiz. Tekrar testleri gerçekleştirildiğinden kifayetsiz sonuçlar atılırlar. Sonucumuz
(kız mı erkek mi) araştırma bilgisini karşıladığında ya da karşılamadığında doğru ve yanlış sonuçlar tanımlanır.
Sonuçlar  Araştırmamız kontrolleri geçemeyen numuneleri çıkardıktan sonra 31 müşteri numunesi kullanmıştır. Sadece ilk arındırma  prosesi (bireysel örnek kontrollerini geçen) dikkate alınmıştır. %12.9 kifayetsizlik oranı ile 4 kifayetsiz sonuç vardı. Normalde iki arıtım yapıldığından ve bu çalışma da veri bir arıtım prosesinden olduğundan kifayetsiz aralığına düşen örnekler çıkarıldı.
Bu bize 27 toplam sonuçtan 26 doğru sonuç bıraktı ki bu %96.23 doğruluk demektir. 12 doğru erkek ve 14 doğru erkek ve bir yanlış pozitif ve sıfır yanlış negatif vardı. Spesifiklik %92.3 ve duyarlılık 100%’idi.
Tartışma:
Sonuçlarımız doğruluğu etkileyen faktörlerin minimize edilebileceği alanları göstermeye yardım etmektedir:
 Talimatları dikkatli şekilde takip etmemek: yanlış şekilde taşınmış kitler, yanlış yıkanan eller ve toplama alanının
hijyeninin sağlanmaması
 Örneğin kirletilmesi: erkeklerin kit içeriklerine dokunması ya da numune alımına yardım etmeleri.
 Testi gebelikten sonra 7 hafta geçmeden yapmak
 Daha önceden bir kan nakli, düşük ya da kürtaj geçirmek
 Yetersiz kan örneği vermek
 Örneği sıcak bir ortamda bırakmak
Sonuçlarımız doğruluğu etkileyen kontrol edilemeyen faktörlerin alanlarını göstermeye de yardım etmektedir:
 Erken hamilelik dönemlerinde fetal DNA’nın doğal olarak düşük olması açık bir işaret üretmesi için yeterli DNA
sağlamayacaktır.
 Kaybolan ikizler: bazı hamilelikler birden fazla fetus ile başlar ama hamileliğin çok erken aşamalarında fetuslardan
biri sona erer. Çoğu durumda bu kadın bilmeden olur. Eğer kaybolan ikiz “erkek” ise ve diğer kalan fetus dişi ise
Pink or Blue® sonuçları yanlış olabilir ancak mevcut kalite kontrol prosedürlerimizle bu çok nadirdir.
 Önceki erkek hamileliği: çok nadir vakalarda, fetal hücreler enenin vücudunda doğumdan birkaç yıl sonra daha
kalabilmektedir. Teknolojimiz bu DNA’nın birazını kirlenme formunda tespit edebilmektedir; ancak testin
doğruluğunun bu nadir durumdan etkilenebileceği durumlar olabilir;
 Erkek bir donörden kemik iliği nakli almak, kan nakilleri, düşükler ya da kürtajlar: teknolojimiz önceki erkek
hamileliklerinden ya da erkek kan/ kemik donörlerinin DNA’sını çoğu durumda kirlenme formunda tespit edebilmektedir; ancak testin doğruluğunun etkilenebileceği durumlar olabilir.
Sonuçlar:  Bu rastgele alt örneğe dayalı olarak metodumuzun doğruluğu %96.23’dür. Consumer Genetics, Pink or Blue® erken cinsiyet
testinin doğruluğunu izlemek ve iyileştirmek için büyük çaba harcamaktadır. Hedefimiz %95’den daha fazla doğruluk
sağlamaktır. Testi iyileştirmek için bazı yollar kirlenmeyi tespit etmek için daha sağlam bir metodun geliştirilmesi ve katalizör
ve ekipmanı sürekli çalışır durumda tutmak için daha keskin kalite kontrol metotları uygulamayı içermektedir.